禽偏肺病毒
分类:疾病防治

  禽偏肺病毒(Acian metapneumovirus, aMPV)自从被确定为火鸡生产中具有重要经济性的病原以来,又发现该病毒还存在于其他家禽品种。该病毒在世界某些地区具有重要的意义,而在其他地区的情况尚不清楚。该病毒会对家禽产生怎样的影响?

  

  鸡可以感染多种呼吸道病毒,最近加入此病毒家庭的成员是一种养鸡业必须对付的全新病毒——禽偏肺病毒(Acian metapneumovirus, aMPV)。该病毒引起的疾病最早在火鸡上发现,不久该病成为在全球范围内具有经济重要性的火鸡疾病。然而,aMPV在鸡中的感染情况仍然不是很清楚。aMPV所致疾病的重要性在一些国家受到高度关注,而在另一些国家却尚未听说。

  

  1 疾病历史

  

  在20世纪70年代,南非报道了一种影响火鸡的严重呼吸道疾病。该病传播迅速,发病率高,死亡率不定(火鸡的死亡率可能较高);出现打喷嚏、罗音、鼻窦炎、结膜炎、眼部有分泌物、鼻漏,以及蛋禽产蛋下降等临床症状。该疾病被称为火鸡气管炎(turkey rhinotracheitis, TRT),之后在全球许多活鸡生产国均有报道。

  

  自20世纪80你年代以后,从出现呼吸到症状、并通常伴有头肿大的病鸡中分离到了TRT的病原体。报道说,在上世纪90年代,许多国家都普遍监测到了TRT抗体。但是,仅有少数国家报道监测到了TRT抗原。在产蛋鸡中,TRT的病原体直接或间接地引起蛋的品质和产蛋量下降。

  

  2 病因学调查

  

  该病的发病原因起初被认为是细菌引起的,大多数怀疑集中在禽波氏杆菌(Bordetella avium),该菌是一种重要的常见火鸡病原体。但是,之后通过鸡胚和气管培养,分离到了TRT的病原体,并被鉴定为一种病毒。鸡原病毒及类似的分离株被鉴定为一种肺病毒。但是,随着从人群中分离到相似的病毒后,这种禽源病毒和类似的分离株被重新分类为禽偏肺病毒(Acian metapneumovirus, aMPV)。aMPV归属副粘病毒科、肺病毒亚科、偏肺病毒书,含有一条不分节段的单股负链RNA。电子显微镜观察显示,aMPV的形态呈多形性边缘、近似球形结构

  

  有一段时间aMPV被认为只有一种血清型。但是,利用单克隆抗体和分子生物学方法研究后表明,aMPV存在2个明显不同的血清型:血清亚型A和B。1997年,从美国科罗拉多州爆发呼吸道疾病的火鸡中分离鉴定出另一种血清型,命名为血清亚型C。在一起不太相关的事件中,法国科学家在鸭中发现了类似于血清型C的aMPV。2000年,从法国火鸡中分离到一株非A、非8或非C亚型,之后被命名为血清亚型D。

  

  aMPV亚型A和B除了美国、加拿大和澳大利亚外,世界其它地域均有报道;血清亚型C仅仅在美国发现;法国已经报道了所有四种血清亚型(A、B、C和D),但最常检测到的是血清亚型A和B。

  

  3 感染鸡的临床表现

  

  在野外条件下,如果存在促使病情加重的因素.鸡感染aMPV后会出现温和或严重的呼吸道疾病。如果不存在并发感染,aMPV感染鸡可能并不出现多种临床症状而康复。事实上,疾病(或感染)可能常常耒被注意到。然而,当与其它呼吸道病原体(如传染畦支气管炎病毒(IBV)、新城疫、传染性喉气管炎、鸡败血支原体(Mycoplasma gallisepticum)、关节液支原体(Mycoplasma synoviae)或其它细菌/真菌并发感染时,病情会更加严重,病程延长。不当的管理条件,如通风不良、氨气浓度高、饲养密度大以及应激性管理操作(如免疫时的抓鸡、转群等),会提高发病率和病情的严重程度。在过去二十年里,aMPV与鸡肿头综舍症(swollen syndrome,SHS)的发生有关,后者主要表现为眼眶周围和眶下窦肿胀,其它症状有打喷嚏、咳嗽、鼻漏和眼漏(图2);已报道,有些病例会出现斜颈和共济失调症状。发病率和死亡率通常分别低于4%和2%。其它病原体(如大肠杆菌和IBV洞样会与SHS并发感染。

  

  在实验条件下,仅仅aMPV不会导致SPF鸡出现严重的临床症状。虽然观察不到明显的呼吸道症状,但当轻轻挤压病鸡的鼻腔时,可见到从鼻孔流出的清亮或浑浊的液体(图3),大约出现在感染后3~9d。幼鸡和雏鸡很可能会出现更为严重的临床症状。特别是在仔肉鸡。该临床症状可在几天内消失。感染鸡的临床症状经常仅持续一天,随后完全康复。但是,当鸡感染强毒aMPV后并发感染致病性大肠杆菌时,呼吸道病状明显加重。到目前为止,SHS人工感染复制实验尚未获得成功。

  

  产蛋鸡在人工感染实验中,仅通过静脉攻毒aMPV时蛋的品质和产蛋量才会受到影响。家禽兽医在现场已经观察到,aMPV感染的某些病例会出现产蛋量下降和蛋壳色素沉积效果降低。可通过接种抗aMPV感染的弱毒和灭活疫苗预防这种损失。

  

  4 宿主动物

  

  aMPV已广泛存在多种家禽,但火鸡是其主要的贮库,之后才是鸡。近年来,通过抗原或抗体检测证实了aMPV感染存在于雉、鸭、珍珠鸡、鸵鸟、海鸥、麻雀和其它野生迁徙鸟。事实上,在美国已从小鼠和大鼠中检测到C亚型aMPV。人们至今尚不清楚野生鸟类或动物在该病毒传播上的重要性。

  

  5 传播

  

  自从该病被确认和检测到aMPV以来,一直怀疑其通过水平方式传播。该病主要是通过感染禽和非感染禽之间的直接接触进行传播。禽舍和养禽场内被污染的饮水、食物或其它材料也可能是潜在的病毒传染源。饲养设备及车辆的移动和人员的流动也会造成疾病在养禽场内或养禽场间的传播。有人认为病毒可能会通过空气传播,但仍需证实。其它可能的传染途径有新引进养禽场的家禽、禽舍内和禽舍周围的野生鸟类(迁徙鸟或当地鸟)。需要强调的是,可提高家禽应激的因素(如频繁抓鸡、管理作业、通风不良、饲养密度过大以及环境龌龊(即高水平尘埃、氨气,死鸡不作回收处理)),均可提高家禽对aMPV的易感性。由于病毒具有适合在饲养有多种年龄家禽的饲养场中生长的特征,故aMPV可在生产周期中停留数月或效年之久,或者直至采取合适的预防措施为止。

  

  到目前为止,还没有明确的科学证据可证明aMPV可以垂直途径传播。但是,已经在刚出壳的1日龄苗鸡和雏鸡检测到了aMPV,这有可能是蛋壳表面被病毒污染(可能通过感染的输卵管)和其它的孵化废弃物(如粪便、皮屑和绒毛)以及刚出壳苗鸡之间的直接接触造成了疾病的水平传播。

  

  6 大体和显微病变

  

  如前面所述,单单aMPV几乎不引起明显的临床症状,这意味着很少能见到临床病理性损害。但是,如果并发感染其它呼吸道病,可见到头和颈部皮下水肿,这似乎是由于严重的蜂窝组织炎导致了随后的胶冻状或粘稠的脓性渗出物在皮下积聚。其它的病理变化包括眼眶内窦肿大,内含清亮或浑浊的渗出液。对鼻甲骨的检查显示渗出物中有炎性细胞浸润。有些病例可能存在跟结膜炎和眼睑增厚。

  

  由于病变不具有特征性,病理组织学检查对于aMPV感染的诊断无多大价值。感染鸡的鼻甲和气管样品经常可见局灶性病变,如上皮纤毛脱落、单核炎性细胞浸润。

  

  7 免疫力

  

  火鸡亲本感染aMPV后,其仔火鸡的母源抗体(maternally-derived antibodies,MDA)似乎在保持锥火鸡不发生临床疾病或感染上效果甚微,甚至没有作用。aMPV的母源抗体对鸡的这种保护作用尚未见报道,但可以推测类似的情景可能存在。用aMPV活疫苗免疫接种母源抗体阳性雏鸡,可能在几周内不能激发接种雏鸡产生理想水平的体液抗体(用ELISA方法检测)。但是,对SPF鸡(aMPV母源抗体阴性)进行相同的免疫接种,能够诱导接种的SPF鸡产生良好水平的体液抗体。有趣的是,当这些试验雏鸡用 aMPV强毒攻击时,两种类型的雏鸡均得到完全保护,不产生临床疾病。这一结果表明了局部免疫和细胞介导免疫应答在抗临床疾病和抗感染上的重要性。

  

  在产蛋鸡,大量的实验和现场观察结果证实,高水平的血清aMPV抗体蛋鸡的产蛋量和蛋品质(如褐壳蛋的色素沉着力下降)具有良好的保护作用。因此,似乎可以说体液抗体对于蛋鸡生殖器官的保护是至关重要的。

  

  8 诊断

  

  一旦在任一类型的鸡出现了与aMPV感染有关的临床症状(表1),所有可能的原因都必须加以考虑,包括与饲养管理和传染性疾病有关的阏素。在产蛋母鸡,可见到蛋的品质和产蛋量下降。通常会发生多种病原体并发感染,颓繁地进行无规律的管理作业很可能是疾病发生的一个重要原因。以上这些因素以及它们之间的相互作用应该引起那些通常遭遇多种呼吸道病原并发感染的国家重视。这一点是非常重要的,因为鸡aMPV感染可能会被误诊,以及aMPV感染的临床症状与其它常见疾病(表2)相似,所以,需要进行认真的临床调查以避免混淆。首先,诊断性的调查可侧重活鸡,随后对病死鸡剖检诊断,并采集样品。

  

  表1 鸡感染aMPV后出现的一种或多种临床症状

  

  

症状

  

症状

  

摇头

  

共济失调

  

头部肿大

  

结膜炎

  

搔抓头部

  

兖矿周围水肿

  

精神沉郁

  

眶内窦肿大

  

呼吸音

  

产蛋下降

  

斜颈

  

蛋壳质量下降

  

眼部充满分泌物

  

 

  

  

表2 aMPV感染鸡的临床症状可能是温和而暂时的,而且常常不引起注意或者被错误地解释为由其他常见病因(也有呼吸道症状和产蛋或蛋壳质量下降)所致

  

  

新城疫

  

禽脑脊髓炎

  

传染性支气管炎

  

维生素A缺乏症

  

低致病性禽流感

  

氨气

  

传染性喉气管炎

  

尘埃性环境

  

慢性呼吸道病

  

霉菌毒素中毒

  

产蛋下降综合症

  

热应激

  

其他因素(可查阅地方或国际性文献资料)

  

  

  8.1 病例调查

  

  对活鸡进行aMPV感染的诊断时,可采集咽喉棉拭和血液棒品,分别检测抗原或血清抗体的存在,每间鸡舍的样品数量最好不少于20份。在感染鸡临床症状出现之前采集棉拭样品,可极大地提高aMPV检测的几率,由于这一点不易做到,所以棉拭样品应采自于多种情况的鸡只,包括无明显症状以及出现轻度或严重临床症状的那些鸡。如用于病毒分离,棉拭样品预先置入病毒分离培养基中(湿拭子),以提高病毒分离的成功率。如采用分子生物学方法检测aMPV基因组(如反转录多聚酶链式反应,RT-PCR),棉拭样品不必使用培养基(即干拭子)。

  

  在死后剖检时,可采集鼻甲、气管和肺样本,如果可行的话,还可采集眶下窦和气管棉拭。如果不能进行尸检和棉拭采集,建议取鸡头和颈至胸腔人口的部分,并包裹完好,置于填充冰块的隔热容器中,送交专业实验室检验。

  

  样品的正确运输和保存可提高病毒分离或抗体检测的几率。用于RT-PCR抗原检测时,干拭子可在室温下运输和保存,但必须避免阳光直接照射和防热。用于病毒分离时,湿拭子最好采用冷链保存和运输,可将棉拭样本放置于填充冰块的聚苯乙烯隔热容器中。试管或注射器中的全血样本在提交实验室检测之前可室温保存过夜,但最好在送检前分离血清,理想情况下是采取冷藏保存和运输。血清可在-20℃下冻结保存。用于病毒分离的组织样品应尽可能快地递送实验室,同样最好在冷藏条件下运送。如果无法及时提交。组织样品也可在-70℃或至少-20℃冷冻保存后再运送。

  

  8.2 实验室研究分析

  

  实验室自接收样品开始,应对送检样品的详细资料作记录,在进行病毒抗原或抗体检测之前,样品可予以暂时保存。

  

  不管是采用分子方法还是传统方法检测aMPV抗原,拭子和组织样品均需进行处理。多数aMPV的诊断都是采用RT-PCR方法,并可在二天内完成。遗憾的是,该方法不能为以后的研究工作提供活病毒。有些实验窒尝试采用气管环培养法(tracheal organ culture, TOCs)分离aMPV病毒,该方法可支持亚型A和B的生长,结果显示病毒在TOCs中纤毛运动完全停滞。

  

  后来利用免疫荧光法或RT-PCR方法证实aMPV的确存在。已尝试采用鸡胚成纤维细胞(CEF)或Vero细胞培养分离C亚型aMPV。除TOC方法和Vet0细胞培养法之外,对易感家禽(多数采用雏火鸡)攻毒、鸡胚卵黄囊接种和其它细胞培养物被证实可用于病毒的分离鉴定。多数实验室报道他们有能力分离鉴定到aMPV亚型(图4),但极少能做到通过核苷酸测序来区分同一亚型的野毒株和疫苗株。

  

  8.3 实验室结果解释

  

  用实验室结果来解释aMPV感染是件复杂而困难的事。重要的是,在下任何结论之前,禽病调查人员应分析考虑多种因素,如发病家禽所在地区/国家/养禽场,家禽生产史、临床症状、病变、疫苗、免疫程字和免疫方法。总之,在未使用疫苗预防aMPV的禽场,如果RT-PCR检测或病毒分离呈阳性,则表明该场家禽感染了aMPV。但是,众所周知在病毒感染早期的正确采样(主要指采样的时间)对检测和鉴定aMPV是极其重要的,因此aMPV检测结果呈阴性并不能充分证明家禽未受到aMPV感染。因此,需要重复采样以确证无aMPV感染,同时缺乏aMPV抗体。在aMPV免疫鸡群,抗原/抗体检测阳性应结合过去的发病史(如养殖场或该地区的野毒和疫苗株亚型)、本次使用的疫苗和免疫程序再作分析。如检测到与本次使用的疫苗株不同的亚型,则毫无疑问表明在该禽场同时存在其它亚型。如果检测到与疫苗毒亚型相同的病毒亚型,可采取进一步分子检测法(如基因测序)以区分是疫苗毒还是野毒。必须记住的是,弱毒苗免疫后数周仍可能检测到疫苗毒。

  

  8.4 血清学

  

  商品化试剂盒可用于aMPV血清抗体的常规检测,然后必须对检测结果进行认真分析和解释。虽然阳性检测结果表明家禽感染了aMPV,但阴性结果并不能排除家禽未感染aMPV,这是因为aMPV感染鸡并非一定会产生体液抗体,或者抗体在采样时未达到可检测到的水平。为获得最佳的抗体检测效果,最好采用包被同源抗原的ELISA反应板。已报道同源aMPV ELISA试验要优于异源aMPV ELISA试验。事实上,要检测aMPV C亚型的抗体,必须使用ELISA试剂盒。

  

  许多国家通常都采用ELISA试剂盒检测免疫后的抗体水平。但是,至少在免疫后的头几周里,活苗免疫的aMPV抗体阳性鸡却不能正常诱导产生理想水平的血清抗体。已经证实,采用异源ELISA试验会掩盖aMPV血清抗体的真实水平。相反,用活疫苗首免和灭活苗二免的种鸡和蛋鸡,有可能产生高水平的可检测体液抗体。

  

  9 预防

  

  与其它传染病一样,高标准的生物安全措施和良好的管理对预防鸡群感染aMPV是极其重要的。总体而言,aMPV对脂类溶质敏感,但是有机物存在时,病毒可存活相当长的时间。美国的研究表明,aMPV C亚型病毒在20℃条件下可在家禽垫料中存活长达4周,37℃时可存活长达2周。因此,必须采取彻底的卫生和消毒措施以防止aMPV在饲养环境中持续的存在。养殖场常用的消毒剂能有效杀灭病毒,但应按消毒剂包装标签上的提示配制有效的使用浓度。

  

  9.1 免疫接种

  

  aMPV也是一种可通过疫苗接种来预防的禽呼吸道病毒。在aMPV作为火鸡鼻气管炎(TRT)的病因被发现后的数年,已研制开发了多种疫苗用于保护火鸡免受此破坏性疾病的影响。实验结果表明,只要正确使用aMPV A亚型致弱疫苗可提供有效保护力。在aMPV B亚型被发现后,交叉保护性试验研究表明,A亚型疫苗可有效地保护免疫家禽抵御aMPV B亚型强毒的感染。C亚型疫苗已有商品化供应,但仅在以该亚型为主要感染毒株的美国有销售。

  

  由于感染aMPV的鸡群比例不断提高,特别是其与鸡肿头综合症(SHS)和产蛋下降的相关性,因此鸡用aMPV疫苗已开发成功。活疫苗可在孵房中对一日龄雏鸡实施喷雾免疫;也可通过喷雾或饮水在养鸡场里对鸡群进行免疫接种。近年来,由于有了特制的禽用疫苗喷雾设备,可保证获得均一的疫苗粒子使家禽取得均匀的喷雾效果,因此越来越多的兽医专家都建议选用喷雾免疫法(该法成本低、效果好)。在一些劳动力成本不成问题的国家,可采用漓鼻、滴眼法免疫。aMPV疫苗有时与其它呼吸道病活疫苗(如鸡新城疫和戚传染性支气管炎)同时使用。如果联合使用多种疫苗免疫,最好向疫苗供应商详细了解aMPV疫苗与其它呼吸道活疫苗的相容性。aMPV灭活疫苗一般采用胸肌或腿肌注射。

  

  9.2 有效保护力的保证

  

  预防aMPV感染的免疫效果受多种因素的影响。一般的原则是,肉鸡用活苗免疫一次,种鸡和蛋鸡活苗免疫l~2次,然后用灭活疫苗加强免疫一次,可提供有效的保护作用以防鸡发生临床疾病和出现产蛋量/蛋品质下降。作为一种可造成养鸡业严重经济损失的全新病原体,兽医人员普遍建议应采用免疫接种方法预防aMPV。

  

  总的来说,许多养鸡生产者报道,在实施aMPV免疫接种方案以后,鸡的死亡率下降、增重提高、饲料转化率改善、产蛋量及蛋品质稳定以及呼吸道病例减少。但在一些养禽场,该免疫效果可能被并发感染其它病的原体、不当的生物安全措施和/或与管理有关的问题所掩盖。

  

  10 结语

  

  根据当地的疫病形势,现代养鸡业主要集中精力预防控制常见的呼吸道疾病,如ND、IB、传染性喉气管炎(ILT)、禽痘(AP)、慢性呼吸道病(CRD)。根据目前作者对aMPV的认识,如果对该相对新的鸡病原体不加以设防或者低估aMPV对鸡的健康和生产难以捉摸的疾病影响,将铸成大错。

  

  原题名:Avian metapneumovirus:an elusive pathogen of chickens

  

  原作者:Ganapathy Kannan博士(英国利物浦大学家禽病理学专家)

  

  周宗清 译自《World Poultry》 2007, Vol.23, NO.4: 36~37: NO.5:35~37

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